اندازه گیری فعالیت آنزیم کاتالاز در گیاهان به روش تیتراسیون یا رنگ سنجی

 در اینجا روش اندازه گیری فعالیت آنزیم کاتالاز به روش  Chance and Maehley, 1955 شرح داده می‌شود. برای این کار 1 میلی‌لیتر از عصاره آنزیمی با 3000 میکرومول بافر فسفات یک دهم مولار با pH=7  و100 میکرومولار آب اکسیژنه (H₂O₂) خالص مخلوط می‌شوند.  و این محلول برای مدت یک دقیقه در دمای آزمایشگاه (دمای 25 درجه سانتی گراد) قرار می‌گیرد. سپس برای توقف فعالیت آنزیم کاتالاز، مقدار 10 میلی‌لیتر اسید سولفوریک 2 درصد به مخلوط اضافه می‌شود. سپس توسط پرمنگنات پتاسیم  یا KMnO₄ یک صدم مولار تا تشکیل رنگ صورتی کم رنگ (حداقل30 ثانیه با رنگ ثابت) تیتر می‌شود و سپس فعالیت آنزیم کاتالاز بر حسب حجم مصرفی محلول پرمنگنات پتاسیم بر حسب درصد کنترل محاسبه می‌گردد.

 

در این واکنش آب اکسیژنه یا پراکسید هیدروژن (H₂O₂) توسط آنزیم کاتالاز موجود در عصاره آنزیمی به آب و اکسیژن تبدیل می‌شود. برای توقف آزمایش از اسید سولفوریک استفاده می‌شود. باقی مانده پراکسیدهیدروژن با پرمنگنات پتاسیم واکنش داده و رنگ صورتی کم رنگ بوجود می‌آید. بنابراین هرچه میزان حجم مصرفی محلول پرمنگنات پتاسیم بیشتر باشد، به مفهوم آن است که آنزیم کاتالاز موجود در عصاره آنزیمی فعالیت کمتری داشته است و مقدار پراکسید هیدروژن به مقدار زیاتری در محلول باقی مانده است. بر‌عکس، هر چه میزان حجم مصرفی محلول پرمنگنات پتاسیم کمتر باشد، به مفهوم آن است که آنزیم کاتالاز موجود در عصاره آنزیمی فعالیت بیشتری داشته است و مقدار پراکسید هیدروژن به مقدار کمتری در محلول باقی مانده است.

 

Chance B., Maehley A. (1955) Assay of catalases and peroxidase, Methods in Enzymology, 2:764–775